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Ultra Low Molecular Weight Protein Marker IV

Catalog No.： RD6127

Storage Condition： -20℃

Shelf Life： 1年

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Catalog No.	Specification	List Price	Preferential Price	VIP	Beijing	Harbin	Shenyang	Guangzhou	Quantity	Cart
RD6127	10T	$55.04

Product Name

Ultra Low Molecular Weight Protein Marker IV

Introduction：

● 使用说明：

第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用；本产品每次使用前，要95℃加热处理5分钟。

一. 制胶：
I 配制分离胶
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（19:1）、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
2．加入10%APS和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4．静置5-10分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
表一（一块0.75mm mini胶用量）

	分离胶	浓缩胶
	18％T, 5%C /6.0 ml	5％T, 3.3%C/2 ml
40% PAA（19:1）	2.7 ml	/
40% PAA (29:1)	/	0.25 ml
4×多肽电泳凝胶缓冲液	1.5 ml	0.5 ml
乙二醇（电泳级）	1.8 ml	/
ddH₂O	/	1.25 ml
10％APS	50-65 μl	20 μl
TEMED	6 μl	2 μl

注：如非必须，不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。

II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（29:1）和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
2．加入10%过硫酸铵和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
4．静置20-30分钟装待凝胶聚合
二. 电泳：
1. 取一管分装好的Marker样品，彻底融化，95℃加热处理5分钟，充分混匀后备用。
2. 电泳前，将10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的内外槽加入1×缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品（样品已经过2×Tricine上样缓冲液处理）加入点样孔，根据表二条件进行电泳，至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽。
表二 多肽电泳条件

恒电压	150 V
起始电流	45-55 mA
结束电流	10-15 mA
电泳时间	2-3小时

三. 染色
根据常规实验步骤，用配方5和6（表三）进行染色和观察。如果使用配方5进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的FastBlue蛋白染色液，该产品能在5分钟之内完成蛋白的染色，不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离，是常规染色液的理想替代品。
表三 小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制

1. 40%PAA（29:1）（配制浓缩胶）丙稀酰胺 38.67g 甲叉双丙稀酰胺 1.33g 用ddH₂O溶解后定容至100 ml，过滤后使用。贮存：4℃避光保存	2. 40% PAA（19:1）（配制分离胶）丙稀酰胺 38 g 甲叉双丙稀酰胺 2 g 用ddH₂O溶解后定容至100 ml，过滤后使用。贮存：4℃避光保存	3. 4×多肽电泳凝胶缓冲液（配制凝胶用） [3MTris; 0.3% SDS; pH8.45] Tris碱 182g ddH₂O 300ml 1.5 g SDS或15ml 10％ SDS 用HCl调pH值至8.45 用ddH₂O定容至500ml 贮存：4℃
4. 10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液 [1MTris;1MTricine ;1% SDS; pH 8.3] Tris碱 121.14g Tricine 179.2g SDS10g 用ddH2O溶解，定容至1000ml(不用调pH)。贮存：4℃ 注：使用前稀释成1×缓冲液使用	5. 染色液冰醋酸 100 ml 甲醇 450 ml 考马斯亮蓝G-250 0.25 g 水 450 ml 6. 脱色液冰醋酸 100ml 水 900ml	7. 2×Tricine蛋白样品上样缓冲液（10ml） 1ml 1MTris-Cl pH6.8 2.4ml 甘油 0.8g SDS 0.31g DTT（或者400μl β-巯基乙醇） 2mg 考马斯亮蓝G-250 用灭菌ddH₂O定容至10ml 混匀分装-20℃贮存备用

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