DAF-FM DA即3-Amino,4-aminomethyl-2',7'-difluorescein, diacetate ,也称DAF-FM diacetate或4-Amino, 5-aminomethyl-2', 7'- difluorescein, diacetate。DAF-FM DA是最新一代用于检测一氧化氮荧光探针,比以前比较常用的一氧化氮荧光检测探针DAF-2 diacetate有多方面的改进。首先,DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比,最后和一氧化氮反应形成的荧光产物受pH 值的影响小,在pH值大于5.5时不受pH值的影响。其次,DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比,前者产生的荧光更加稳定,不容易淬灭,这样更加便于检测。另外,DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比,前者对一氧化氮的检测灵敏度更高,相同条件下检测灵敏度可以提高接近2倍,最低检测浓度可以达到3nM。
DAF-FM DA可以穿过细胞膜(cell-permeable) ,进入细胞后可以被细胞内的酯酶催化形成不能穿过细胞膜的DAF-FM 。DAF-FM本身仅有很弱的荧光,但在和一氧化氮反应后可以产生强烈荧光,激发波长为495nm ,发射波长为515nm 。DAF-FM DA检测一氧化氮的机制可以参考上图。任何可以检测fluorescein的仪器,包括荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计或荧光酶标仪都可以用于该荧光探针的检测。下图为DAF-FM在不同浓度一氧化氮存在时的发射荧光扫描图谱(fluorescence emission spectra)。
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