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乳酸含量(LA)测试盒 (分光光度法)

TOPEK190642
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6个月
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TOPEK190642 50T/24S $99.07
Product Name
Introduction:

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物,与糖代谢、脂类代谢 、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切 相关,乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。

测定原理:

乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸,同时使 NAD+还原生成 NADH  H+H+传递给 PMS 生成的 PMSH2 还原 INT 生成红色物质,在 530nm处有特征吸收峰。

组成:

产品名称

50T/24S

Storage

提取液:液体

55ml

4℃

试剂一 :液体

5ml

4℃

试剂二:液体

12ml

4℃

试剂三:粉剂

1 

-20℃避光

试剂四:粉剂

1 

4℃避光

试剂五:粉剂

1 

4℃避光

标准品:液体

1ml

4℃

说明书

一份

试剂三:粉剂× 1 支,-20℃避光保存 。临用前加入 1.5ml 蒸馏水充分溶解。

试剂四:粉剂× 1 瓶,4℃避光保存 。临用前加 15ml 蒸馏水充分溶解。

显色液:临用前根据用量按照提取液(V):试剂三(V):试剂四(V):试剂五(m)=1(ml):0.3(ml): 3(ml):15(mg)的比例充分混匀 。(注意:现配现用,用多少配多少,在棕色瓶中配制,试剂盒中带有  5 个棕色空瓶)

自备仪器和用品:

天平 、研钵 、离心机 、可见分光光度计  1 ml 玻璃比色皿 、恒温水浴锅。

样本处理:

1.组织:按照质量(g 提取液体积(ml)为 1:5~ 10 的比例(建议称取约 0. 1g,加入 1ml 提取液)加入 提取液,冰浴匀浆后于 4℃,   12000g 离心 10min,取上清测定。

2.细胞:按照细胞数量(104  提取液体积(ml)  500~ 1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1ml 提取液 冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min); 4℃,   12000g 离心 10min,取上清测定。

3.血清:直接测定。

测定操作:

 

样品对照管

样品测定管

标准对照管

标准测定管

样品(μl)

50

50

 

 

标准品(μl)

 

 

50

50

H2O  ( μl)

300

450

300

450

试剂一  ( μl)

150

 

150

 

试剂二  ( μl)

200

200

200

200

显色液(μl)

300

300

300

300

充分混匀,于 37℃反应 30min,于 1ml 玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定 530nm 处吸光值,分别记为 A1,A2,A3,A4,△A 样=A2-A1;△A 标 = A4-A3

 

注意:标准对照管和标准测定管只需测定一次 ,每个样品测定管设一个样品对照管

计算公式:

1.按照蛋白含量计算

LA含量mol/mg prot=△A 样÷△A 标×C 标÷ Cpr

=2 ×△A 样÷△A 标÷ Cpr

2.按照样本质量计算

LA 含量mol/g  鲜重)=△A 样÷ A 标×C 标÷ W

=2 ×△A 样÷△A 标÷ W

3.按照细胞数量计算

LA 含量mol/104 cell=△A 样÷△A 标×C 标÷  细胞数量

=2 ×△A 样÷△A 标÷  细胞数量

4.按照液体体积计算

LA 含量mol/ml=△A 样÷ △A 标×C 标

=2 ×△A 样÷△A 标

C 标:标准品浓度,2mmol/L  ;W:样本质量,g/ml;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml

注意事项:

1.若吸光值超过 2,请进行适当的稀释后再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。

2.最低检出限为 1.8μmol/L。

These protocols are for reference only. Biotopped does not independently validate these methods.

No specification!
Search quality inspection report(COA)
No technical Q&A content!

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